Expresión de enzimas esterasas en la bacteria E. coli DH5a a partir de una librería metagenómica obtenida de la microbiota del pulque

Abstract

El pulque es una bebida fermentada que contiene microorganismos autóctonos como levaduras, bacterias lácticas, etc. Muchos microorganismos son capaces de producir esterasas, las cuales son enzimas que catalizan la hidrólisis de enlace éster y procesos de síntesis orgánica. Dentro de la biotecnología industrial el tratamiento de aguas residuales busca la reducción de desechos orgánicos como triglicéridos donde las esterasas rompen el enlace éster entre el ácido graso y el glicerol. El objetivo de este trabajo es identificar la actividad de enzimas esterasas recombinantes en la bacteria E . coli DH5α a partir de la microbiota del pulque. Lo que se realizó fue una extracción de ADN del pulque para obtener el material genético que posteriormente se cortó y purificó fragmentos de 3kb a 5kb con la enzima de restricción Sau3A. Consecuentemente el vector de clonación pUC19 se linealizó con la enzima compatible BamHI. Se desfostató el plásmido con la enzima “FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase”, a continuación la ligación se realizó empleando la enzima “T4 DNA ligase. La transformación bacteriana, mediante un choque térmico, se realizó utilizando células competentes de E. coli DH5a (200 uL) y 3uL del producto de ligación, la selección de colonias transformadas se realizó con la prueba de la B-Galactosidasa. Finalmente, la identificación de actividad esterasas se realizó con las soluciones HEPES-NaOH, Fast Blue RR y acetato 1-naftil. Las clonas con potencial uso en la industria de aguas residuales, dieron resultados positivos en la prueba de selección B-Galactosidasa y actividad esterasa.